Selección de primers para la aplicación del RAPD-PCR utilizando las variedades 2 y 3 de Solanum sessiliflorum Dunal "cocona" en Iquitos, Región Loreto

Abstract

Solatium sessiliflorum Dunal "cocona" tiene un gran potencial económico, especialmente en nuestra amazonia las variedades 2 y 3, son muy utilizados en los procesos de transformación en la industria alimentaria y en la obtención de licores, néctares, alcoholes, etc. (Carbajal y Huayanay, 2002), pero no posee una caracterización de sus variedades a través de marcadores moleculares. El presente trabajo se hizo con la finalidad de seleccionar primers para las variedades 2 y 3 de Solanum sessiliflorum Dunal aplicando la técnica del RAPD. Los frutos fueron recolectadas del Caserío Timicurillo 1 a zona y trasladadas al Laboratorio de Investigación de la Facultad de Ciencias Biológicas para la extracción de las semillas, de las cuales una parte fue transportada al laboratorio de Micropropagación Vegetal de la Universidad Nacional de la Amazonia Peruana para ser micropropagadas hasta obtener brotes. Estos fueron utilizados en la ejecución del estudio, entre los meses de octubre del 2001 y enero del 2003. Para cumplir con el objetivo se realizó la extracción del ADN por el método CTAB modificado y la cuantificacion por espectrofotometría, obteniéndose los siguientes resultados a partir de 50 mg de material biológico: 40.8 //g ± 5.1 (brotes V2), 35.6 ug ± 1.9 (brotes V3), 14.28 ug ± 0.5 (Semillas V2) y 12.96 ug ± 1.0 (semillas V3) En este estudio se estandarizaron las técnicas RAPD y electroforesis en gel de poliacrilamida. En el RAPD se obtuvo buenos resultados con Cloruro de Magnesio 2.0 mM, Taq polimerasa 0.25 U, dNTPs 0.25 mM, ADN 50 ng y con una temperatura de denaturación de 94°C por 1 min, hibridación 40°C por 1 min y extensión 72°C por 1 min en 40 ciclos. En la electroforesis se obtuvo una óptima resolución de las bandas de los productos de amplificación con un gel al 12% y 1.30 horas de corrido. La tinción argéntica no fue necesario estandarizar porque con las condiciones y concentraciones de los reactivos que recomienda el método de Margni (1996) se obtuvo un revelado adecuado de las bandas de ADN como de sus productos de amplificación. En la amplificación del ADN de las variedades en estudio se emplearon 6 primes aleatorios ( P 1 , P2, P3, P4, P5 y P6), de los cuales 4 generaron bandas polimórficas en brotes y semillas ( P 1 , P2, P4 y P6) hasta en un 67% y bandas polímórficas que van desde 192 hasta 957 pb, pudiendo éstos ser adecuados para la caracterización de las V2 y V3 de Solanum sessiliflorum Dunal.